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由于鸡感染后的临床症状差别很大,不同宿主对感染的反应也不一样,这使诊断更为复杂。因此依据单一临床症状不能作为诊断ND的基础。若出现强毒力病型的有关症状和病变应怀疑本病。


一、病理学诊断
1、临床诊断
(1)体温升高,精神抑郁,食欲下降或废绝;
(2)鸡冠、肉髯发绀,嗉囊积液,拉黄绿色粪便;
(3)发病3-5天后出现神经
症状:颈部扭曲、仰头观星、抽搐或麻痹;
(4)呼吸困难,产蛋下降20%-70%,蛋壳褪色、变薄、变脆,软壳蛋和畸形蛋增多。
2、病理变化
(1)气管充血、出血,有大量黏液,嗉囊内有酸臭液体;
(2)腺胃乳头水肿、出血或有白色脓性分泌物,肌胃角质层下有出血点、斑或溃疡;
(3)十二指肠、卵黄蒂附近、回盲部的淋巴滤泡肿胀、出血、有枣核样溃疡;
(4)盲肠扁桃体出血、肿胀,直肠有条纹状出血,有事内有


二、病原鉴定诊断
1、样品采集
从死禽采集的样品有口鼻拭子,还有肺、气囊、肠、脾、脑、肝和心组织,这些样品可单独或混合采集。
从活禽采集的样品应包括气管和泄殖腔拭子。在采集样品机会少的地方,除了受感染的或者有相关临床症状的器官和组织外,主要的应是泄殖腔拭子(或粪便)和气管拭子(或者气管组织)。
2、样品处理
样品置于含抗生素的磷酸盐缓冲液(pH7.0至7.4)中,抗生素视具体情况而变化,但对组织和气管拭子应含青霉素(2000单位/ml),链霉素(2mg/ml),卡那霉素(50μg/ml)和制霉素(1000单位/ml),而对粪便和泄殖腔拭子其浓度要提高5倍。加入抗生素后调节pH值到7.0至7.4是很重要的。粪便和搅碎的组织,应用抗生素溶液制成10至20%的悬液。样品应尽可能地处理,首先在室温下静置1至2小时。没有条件的话,样品可在4℃保存几天。
3、样品检查
粪便或组织的悬浮液经离心后取上清液,尿囊腔接种至少5个9至11天的SPF鸡胚,在35℃-37℃培育4至7天。收集死的和快死的以及培养结束时活下来的鸡胚尿囊液,于4℃致冷,随后检测尿囊液的HA活性。阴性者至少用另一批蛋再传代一次。
用特异性的抗血清可以证实NDV的存在,通常使用鸡的抗血清,它们是用NDV毒株中的一个毒株制备的。
试验以相同的血清PBS作连续对倍稀释,每孔0.025ml,随后每孔加入4个血凝单位的抗原0.025ml,作用15至30分钟后,加入1%的0.025ml鸡红细胞,轻轻混匀,45分钟判定结果。能完全抑制4个抗原的血清最高稀释度即为血凝抑制(HI)滴度。将板倾斜判读,凝集试验更准确。只有那些孔的红细胞同不含病毒对照孔的红细胞出现相同的“流动”时才认为是血凝抑制。
有些非鸡的禽类血清含有对鸡红细胞所特有的非特异性凝集素,因此,可用鸡血红细胞吸收试验血清,以排除凝集素或者采用研究对象的动物种的红细胞。
4、分离株毒力评价
不同NDV分离株的毒力很不相同,而且由于新城疫活苗的广泛应用,仅从具有临床症状的病禽分离出病毒进行鉴定,不能构成对ND的诊断,还应进行分离物毒力的评定。NDV分离株的致病性不能在体外进行,所以评估致病性常根据下面一种或多种试验来确定。
(1)鸡胚平均死亡时间
将新鲜的感染尿囊液用生理盐水连续10倍递增稀释成6Log10~9Log10,每个稀释度接种5个9至10日龄的SPF鸡胚,每个鸡胚接种0.1ml,随后置于37℃。剩余下的病毒稀释液保存于4℃,于8小时后,每个稀释度接种另外5个鸡胚,每个鸡胚接种0.1ml,置于37℃养。每天观察二次,共观察7天。每次观察都要记录每个鸡胚死亡的时间。
利用鸡胚平均死亡时间可将NDV株分为强毒力型,其死亡时间低于或等于60小时;中等毒力型,其死亡时间在61至90小时之间;温和型,其死亡时间大于90小时。
(2)
脑内致病指数
4Log2
以上血凝滴度的新鲜感染尿囊液,用等渗无菌盐溶液作10倍稀释,不加添加剂,脑内接种1日龄的SPF雏鸡,共接种10只,每只接种0.05ml。每24小时观察一次小鸡,共观察8天。每一天观察应给鸡打分,正常鸡记作0,病鸡记作1,死亡鸡记作2,脑内致病指数是每只鸡8天内所有每次观察数值的平均数。最强毒力病毒的脑内致病指数将接近最大值2.0,而温和型毒株的值接近0。
(3)
静脉致病指数
血凝滴度高于4Log2的新鲜的尿囊液用灭菌等渗盐水作1∶10稀释,由静脉接种6周龄的SPF小鸡,接种10只,每只接种0.01ml。每天观察一次,共10天。每次观察要记分,正常鸡记作0,病鸡记作1,瘫痪鸡记作2,死亡鸡记作3,静脉致病指数是指10天内每次观察每只鸡记录的平均数。温和型毒株和一些中等毒力型毒株的值为0,而强毒力型毒株可达到3.0。
但这些试验也可有较小的改动。用未稀释的尿囊液擦拭6周龄的鸡的泄殖腔和结膜代替上述试验,其目的在于区别亲内脏的强毒力型和其他强毒力型病毒。


三、血清学诊断
ND
病毒可作为抗原,用于各种血清学试验,例如中和试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)。目前大都使用血凝抑制试验。鸡血清在这种试验中很少有非特异性反应,所以血清不要作预处理。除鸡以外的其他禽种血清,有时对鸡的红细胞有凝集作用,故试验前应首先测定这种特性,然后用鸡红细胞对试验血清进行吸附,以排除非特异性凝集。
在诊断中血清学的值同感染家禽的免疫状态有关。如果按1∶8稀释的血清或者高于这个稀释度能抑制4个血凝单位的抗原,被判为阳性。为评价鸡群的免疫状况可用血凝抑制试验,当我们正在对免疫过的鸡群进行监测,有可能检出突然升高的抗体应答,这是野毒感染所致,但应注意其他原因引起的变化,例如已免疫新城疫病毒的火鸡再感染PMV~3病毒时,滴度会升高。

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